డెల్లా ప్రోటీన్లు సంరక్షించబడ్డాయిపెరుగుదల నియంత్రకాలుఅంతర్గత మరియు బాహ్య సంకేతాలకు ప్రతిస్పందనగా మొక్కల అభివృద్ధిలో కీలక పాత్ర పోషిస్తాయి. ట్రాన్స్క్రిప్షనల్ రెగ్యులేటర్లుగా, డెల్లాలు (DELLAలు) వాటి GRAS డొమైన్ల ద్వారా ట్రాన్స్క్రిప్షన్ ఫ్యాక్టర్లు (TFలు) మరియు హిస్టోన్ H2Aకు బంధించబడి, ప్రమోటర్లపై పనిచేయడానికి నియమించబడతాయి. ఇటీవలి అధ్యయనాలు డెల్లా స్థిరత్వం పోస్ట్-ట్రాన్స్లేషనల్గా రెండు విధానాల ద్వారా నియంత్రించబడుతుందని చూపించాయి: మొక్క హార్మోన్ ద్వారా ప్రేరేపించబడిన పాలియుబిక్విటినేషన్.గిబ్బరెల్లిన్ఇది వాటి వేగవంతమైన క్షీణతకు దారితీస్తుంది, మరియు చిన్న యుబిక్విటిన్-వంటి మాడిఫైయర్ (SUMO)తో సంయోగం వాటి సంచయాన్ని పెంచుతుంది. అంతేకాకుండా, DELLA కార్యాచరణ రెండు విభిన్న గ్లైకోసైలేషన్ విధానాల ద్వారా డైనమిక్గా నియంత్రించబడుతుంది: O-ఫ్యూకోసైలేషన్ DELLA-TF పరస్పర చర్యను మెరుగుపరుస్తుంది, అయితే O-లింక్డ్ N-ఎసిటైల్గ్లూకోసమైన్ (O-GlcNAc) మాడిఫికేషన్ DELLA-TF పరస్పర చర్యను నిరోధిస్తుంది. అయితే, DELLA ఫాస్ఫోరైలేషన్ పాత్ర అస్పష్టంగా ఉంది, ఎందుకంటే మునుపటి అధ్యయనాలు పరస్పర విరుద్ధమైన ఫలితాలను చూపించాయి, కొన్ని ఫాస్ఫోరైలేషన్ DELLA క్షీణతను ప్రోత్సహిస్తుందని లేదా అణిచివేస్తుందని సూచిస్తుండగా, మరికొన్ని ఫాస్ఫోరైలేషన్ వాటి స్థిరత్వాన్ని ప్రభావితం చేయదని సూచిస్తున్నాయి. ఇక్కడ, మేము మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ ద్వారా అరాబిడోప్సిస్ థాలియానా నుండి శుద్ధి చేయబడిన GA1-3 రిప్రెసర్ (RGA), AtDELLAలోని ఫాస్ఫోరైలేషన్ సైట్లను గుర్తిస్తాము మరియు PolyS మరియు PolyS/T ప్రాంతాలలో రెండు RGA పెప్టైడ్ల ఫాస్ఫోరైలేషన్, H2A బంధాన్ని మరియు లక్ష్య ప్రమోటర్లతో RGA అనుబంధాన్ని ప్రోత్సహించడం ద్వారా RGA కార్యాచరణను మెరుగుపరుస్తుందని చూపిస్తాము. ముఖ్యంగా, ఫాస్ఫోరైలేషన్ RGA-TF పరస్పర చర్యలను లేదా RGA స్థిరత్వాన్ని ప్రభావితం చేయలేదు. ఫాస్ఫోరైలేషన్ డెల్లా (DELLA) కార్యాచరణను ప్రేరేపించే ఒక అణు యంత్రాంగాన్ని మా అధ్యయనం వెల్లడిస్తుంది.
మా మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రిక్ విశ్లేషణలో, GA-లోపం ఉన్న Ga1 నేపథ్యంలోని RGAలో Pep1 మరియు Pep2 రెండూ అధికంగా ఫాస్ఫోరైలేషన్ చెందాయని వెల్లడైంది. ఈ అధ్యయనంతో పాటు, ఫాస్ఫోప్రోటియోమిక్ అధ్యయనాలు కూడా RGAలో Pep1 ఫాస్ఫోరైలేషన్ను వెల్లడించాయి, అయినప్పటికీ దాని పాత్ర ఇంకా అధ్యయనం చేయబడలేదు53,54,55. దీనికి విరుద్ధంగా, Pep2 ఫాస్ఫోరైలేషన్ ఇంతకు ముందు వివరించబడలేదు, ఎందుకంటే ఈ పెప్టైడ్ను RGAGKG ట్రాన్స్జీన్ను ఉపయోగించి మాత్రమే గుర్తించగలిగారు. Pep1 ఫాస్ఫోరైలేషన్ను రద్దు చేసిన m1A మ్యుటేషన్, మొక్కలో RGA కార్యాచరణను కొద్దిగా మాత్రమే తగ్గించినప్పటికీ, RGA కార్యాచరణను తగ్గించడంలో m2Aతో కలిపినప్పుడు ఇది ఒక సంకలిత ప్రభావాన్ని చూపింది (అనుబంధ చిత్రం 6). ముఖ్యంగా, ga1తో పోలిస్తే GA-మెరుగుపరచబడిన sly1 మ్యూటెంట్లో Pep1 ఫాస్ఫోరైలేషన్ గణనీయంగా తగ్గింది, ఇది GA, RGA డీఫాస్ఫోరైలేషన్ను ప్రోత్సహించి, దాని కార్యాచరణను తగ్గిస్తుందని సూచిస్తుంది. GA, RGA ఫాస్ఫోరైలేషన్ను ఏ యంత్రాంగం ద్వారా అణచివేస్తుందనే దానిపై మరింత పరిశోధన అవసరం. గుర్తించబడని ఒక ప్రోటీన్ కైనేజ్ యొక్క నియంత్రణ ద్వారా ఇది సాధించబడుతుందనేది ఒక అవకాశం. వరిలో GA ద్వారా CK1 ప్రోటీన్ కైనేస్ EL1 యొక్క వ్యక్తీకరణ తగ్గుతుందని అధ్యయనాలు చూపినప్పటికీ41, అరాబిడోప్సిస్ EL1 హోమోలాగ్ (AEL1-4) యొక్క ఉన్నత-స్థాయి ఉత్పరివర్తనాలు RGA ఫాస్ఫోరైలేషన్ను తగ్గించవని మా ఫలితాలు సూచిస్తున్నాయి. మా ఫలితాలకు అనుగుణంగా, అరాబిడోప్సిస్ AEL ఓవర్ఎక్స్ప్రెసింగ్ లైన్లు మరియు ఒక ael ట్రిపుల్ మ్యూటెంట్ను ఉపయోగించి ఇటీవల జరిపిన ఒక ఫాస్ఫోప్రోటియోమిక్ అధ్యయనం, ఈ కైనేస్లకు సబ్స్ట్రేట్లుగా ఏ DELLA ప్రోటీన్లను గుర్తించలేదు56. మేము ఈ మాన్యుస్క్రిప్ట్ను సిద్ధం చేసినప్పుడు, గోధుమలో (ట్రిటికమ్ ఏస్టివమ్) GSK3/SHAGGY-వంటి కైనేస్ను ఎన్కోడ్ చేసే జన్యువైన GSK3, DELLA (Rht-B1b)ను ఫాస్ఫోరైలేట్ చేయగలదని నివేదించబడింది57, అయినప్పటికీ మొక్కలో GSK3 ద్వారా Rht-B1b యొక్క ఫాస్ఫోరైలేషన్ నిర్ధారించబడలేదు. GSK3 సమక్షంలో ఇన్ విట్రో ఎంజైమాటిక్ చర్యలు జరిపి, ఆ తర్వాత మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ విశ్లేషణ చేసినప్పుడు, Rht-B1b యొక్క DELLA మరియు GRAS డొమైన్ల మధ్య మూడు ఫాస్ఫోరైలేషన్ సైట్లు ఉన్నట్లు వెల్లడైంది (సప్లిమెంటరీ ఫిగ్. 3). ఈ మూడు ఫాస్ఫోరైలేషన్ సైట్లలో సెరైన్ను అలనైన్గా మార్చడం వల్ల ట్రాన్స్జెనిక్ గోధుమలో Rht-B1b చర్య తగ్గింది. ఇది, Pep2 RGAలో అలనైన్ మార్పులు RGA చర్యను తగ్గిస్తాయన్న మా పరిశోధనలకు అనుగుణంగా ఉంది. అయితే, ఇన్ విట్రో ప్రోటీన్ క్షీణత పరీక్షలు ఫాస్ఫోరైలేషన్ Rht-B1b57ను స్థిరీకరించగలదని మరింతగా నిరూపించాయి. ఇది, Pep2 RGAలో అలనైన్ మార్పులు మొక్కలో దాని స్థిరత్వాన్ని మార్చవని చూపించే మా ఫలితాలకు విరుద్ధంగా ఉంది. గోధుమలోని GSK3, అరాబిడోప్సిస్లోని బ్రాసినోస్టెరాయిడ్-ఇన్సెన్సిటివ్ ప్రోటీన్ 2 (BIN2) యొక్క ఆర్థోలాగ్ 57. BIN2 అనేది BR సిగ్నలింగ్కు ఒక నెగటివ్ రెగ్యులేటర్, మరియు BR, BIN2 క్షీణతకు కారణం కావడం ద్వారా దాని సిగ్నలింగ్ మార్గాన్ని యాక్టివేట్ చేస్తుంది 58. BR చికిత్స అరాబిడోప్సిస్లో RGA స్థిరత్వాన్ని 59 లేదా ఫాస్ఫోరైలేషన్ స్థాయిలను తగ్గించదని మేము చూపించాము (సప్లిమెంటరీ ఫిగర్ 2), ఇది RGA, BIN2 ద్వారా ఫాస్ఫోరైలేట్ అయ్యే అవకాశం లేదని సూచిస్తుంది.
అన్ని పరిమాణాత్మక డేటాను ఎక్సెల్ ఉపయోగించి గణాంకపరంగా విశ్లేషించారు మరియు స్టూడెంట్స్ టి-టెస్ట్ ఉపయోగించి గణనీయమైన తేడాలను నిర్ధారించారు. నమూనా పరిమాణాన్ని ముందుగా నిర్ధారించడానికి ఎటువంటి గణాంక పద్ధతులను ఉపయోగించలేదు. విశ్లేషణ నుండి ఏ డేటానూ మినహాయించలేదు; ప్రయోగం యాదృచ్ఛికం చేయబడలేదు; మరియు ప్రయోగం మరియు ఫలితాల మదింపు సమయంలో పరిశోధకులకు కేటాయింపు గురించి తెలుసు. నమూనా పరిమాణాలు చిత్రాల వివరణలలో మరియు ముడి డేటా ఫైళ్ళలో అందించబడ్డాయి.
పోస్ట్ చేసిన సమయం: ఏప్రిల్-15-2025
