చిన్న జలచర కప్పపిల్లలకు వాణిజ్య సైపర్‌మెత్రిన్ సన్నాహాల వల్ల కలిగే మరణాలు మరియు విషప్రభావం

ఈ అధ్యయనం వాణిజ్యపరమైన వాటి ప్రాణాంతకత, ప్రాణాంతకం కానిత మరియు విషపూరితతను అంచనా వేసింది.సైపర్‌మెత్రిన్అనూరన్ టాడ్‌పోల్స్‌కు వాణిజ్య సైపర్‌మెత్రిన్ ఫార్ములేషన్‌ల యొక్క తక్షణ పరీక్షలో, 100–800 μg/L గాఢతలను 96 గంటల పాటు పరీక్షించారు. దీర్ఘకాలిక పరీక్షలో, సహజంగా లభించే సైపర్‌మెత్రిన్ గాఢతలను (1, 3, 6, మరియు 20 μg/L) మరణాల రేటు కోసం పరీక్షించారు, ఆ తర్వాత 7 రోజుల పాటు మైక్రోన్యూక్లియస్ పరీక్ష మరియు ఎర్ర రక్త కణాల కేంద్రక అసాధారణతలను పరిశీలించారు. టాడ్‌పోల్స్‌కు వాణిజ్య సైపర్‌మెత్రిన్ ఫార్ములేషన్ యొక్క LC50 273.41 μg L−1గా ఉంది. దీర్ఘకాలిక పరీక్షలో, అత్యధిక గాఢత (20 μg L−1) 50% కంటే ఎక్కువ మరణాలకు కారణమైంది, ఎందుకంటే ఇది పరీక్షించిన టాడ్‌పోల్స్‌లో సగాన్ని చంపేసింది. మైక్రోన్యూక్లియస్ పరీక్ష 6 మరియు 20 μg L−1 వద్ద గణనీయమైన ఫలితాలను చూపింది మరియు అనేక కేంద్రక అసాధారణతలు కనుగొనబడ్డాయి, ఇది వాణిజ్య సైపర్‌మెత్రిన్ ఫార్ములేషన్‌కు P. gracilis పై జన్యువిష సామర్థ్యం ఉందని సూచిస్తుంది. సైపర్‌మెత్రిన్ ఈ జాతికి అధిక ప్రమాదకరం, ఇది స్వల్ప మరియు దీర్ఘకాలంలో అనేక సమస్యలను కలిగించి, ఈ పర్యావరణ వ్యవస్థ యొక్క గతిశీలతను ప్రభావితం చేయగలదని ఇది సూచిస్తుంది. అందువల్ల, వాణిజ్య సైపర్‌మెత్రిన్ ఫార్ములేషన్‌లు పి. గ్రాసిలిస్‌పై విషపూరిత ప్రభావాలను కలిగి ఉన్నాయని నిర్ధారించవచ్చు.
వ్యవసాయ కార్యకలాపాలు నిరంతరం విస్తరించడం మరియు తీవ్రమైన అనువర్తనం కారణంగాకీటక నియంత్రణచర్యల వల్ల, జలచరాలు తరచుగా పురుగుమందులకు గురవుతాయి¹,². వ్యవసాయ క్షేత్రాల సమీపంలోని నీటి వనరుల కాలుష్యం ఉభయచరాల వంటి లక్ష్యం కాని జీవుల అభివృద్ధి మరియు మనుగడను ప్రభావితం చేస్తుంది.
పర్యావరణ మాత్రికల అంచనాలో ఉభయచరాలు అంతకంతకూ ప్రాముఖ్యతను సంతరించుకుంటున్నాయి. సంక్లిష్టమైన జీవిత చక్రాలు, వేగవంతమైన లార్వా పెరుగుదల రేట్లు, పోషక స్థితి, పారగమ్య చర్మం¹⁰,¹¹, పునరుత్పత్తికి నీటిపై ఆధారపడటం¹² మరియు రక్షణ లేని గుడ్లు¹¹,¹³,¹⁴ వంటి వాటి ప్రత్యేక లక్షణాల కారణంగా అనూరన్‌లు పర్యావరణ కాలుష్య కారకాలకు మంచి జీవ సూచికలుగా పరిగణించబడతాయి. సాధారణంగా వీపింగ్ ఫ్రాగ్ అని పిలువబడే చిన్న నీటి కప్ప (ఫిసాలెమస్ గ్రాసిలిస్), పురుగుమందుల కాలుష్యానికి ఒక జీవ సూచిక జాతిగా నిరూపించబడింది⁴,5,6,7,¹⁵. ఈ జాతి అర్జెంటీనా, ఉరుగ్వే, పరాగ్వే మరియు బ్రెజిల్‌లలో నిలకడగా ఉన్న నీటిలో, రక్షిత ప్రాంతాలలో లేదా విభిన్న ఆవాసాలు గల ప్రాంతాలలో కనిపిస్తుంది¹⁶¹⁷ మరియు దాని విస్తృత పంపిణీ మరియు విభిన్న ఆవాసాలను తట్టుకోగల సామర్థ్యం కారణంగా IUCN వర్గీకరణ ద్వారా స్థిరమైనదిగా పరిగణించబడుతుంది¹⁸.
సైపర్‌మెత్రిన్‌కు గురైన తర్వాత ఉభయచరాలలో ఉప-ప్రాణాంతక ప్రభావాలు నివేదించబడ్డాయి, వీటిలో టాడ్‌పోల్స్‌లో ప్రవర్తనా, స్వరూప మరియు జీవరసాయన మార్పులు23,24,25, మరణం మరియు రూపాంతర సమయంలో మార్పులు, ఎంజైమాటిక్ మార్పులు, పొదిగే విజయం తగ్గడం24,25, అతి చురుకుదనం26, కోలినెస్టరేస్ చర్య నిరోధం27 మరియు ఈత పనితీరులో మార్పులు7,28 ఉన్నాయి. అయితే, ఉభయచరాలలో సైపర్‌మెత్రిన్ యొక్క జన్యువిష ప్రభావాలపై అధ్యయనాలు పరిమితంగా ఉన్నాయి. అందువల్ల, సైపర్‌మెత్రిన్‌కు అనూరన్ జాతుల సున్నితత్వాన్ని అంచనా వేయడం ముఖ్యం.
పర్యావరణ కాలుష్యం ఉభయచరాల సాధారణ పెరుగుదల మరియు అభివృద్ధిని ప్రభావితం చేస్తుంది, కానీ పురుగుమందుల ప్రభావం వల్ల DNAకు కలిగే జన్యుపరమైన నష్టం అత్యంత తీవ్రమైన దుష్ప్రభావం¹³. రక్త కణాల స్వరూప విశ్లేషణ అనేది కాలుష్యానికి మరియు వన్యజీవులకు ఒక పదార్థం యొక్క సంభావ్య విషప్రభావానికి ఒక ముఖ్యమైన జీవసూచిక²⁹. పర్యావరణంలోని రసాయనాల జన్యువిషప్రభావాన్ని నిర్ధారించడానికి మైక్రోన్యూక్లియస్ పరీక్ష అత్యంత సాధారణంగా ఉపయోగించే పద్ధతులలో ఒకటి³⁰. ఇది వేగవంతమైన, ప్రభావవంతమైన మరియు చవకైన పద్ధతి, ఇది ఉభయచరాల వంటి జీవులలో రసాయన కాలుష్యానికి మంచి సూచికగా పనిచేస్తుంది³¹,³² మరియు జన్యువిషపూరిత కాలుష్య కారకాలకు గురికావడంపై సమాచారాన్ని అందిస్తుంది³³.
మైక్రోన్యూక్లియస్ పరీక్ష మరియు పర్యావరణ ప్రమాద అంచనాను ఉపయోగించి, చిన్న జలచర కప్పపిల్లలపై వాణిజ్య సైపర్‌మెత్రిన్ ఫార్ములేషన్‌ల యొక్క విషపూరిత సామర్థ్యాన్ని అంచనా వేయడమే ఈ అధ్యయనం యొక్క లక్ష్యం.
పరీక్ష యొక్క తీవ్ర దశలో వివిధ గాఢతలలో వాణిజ్య సైపర్‌మెత్రిన్‌కు గురైన పి. గ్రాసిలిస్ టాడ్‌పోల్స్‌లో సంచిత మరణాల శాతం.
దీర్ఘకాలిక పరీక్ష సమయంలో వివిధ గాఢతలలో వాణిజ్య సైపర్‌మెత్రిన్‌కు గురైన పి. గ్రాసిలిస్ టాడ్‌పోల్స్‌లో సంచిత మరణాల శాతం.
వివిధ గాఢతలలో (6 మరియు 20 μg/L) సైపర్‌మెత్రిన్‌కు గురైన ఉభయచరాలలో జెనోటాక్సిక్ ప్రభావాల ఫలితంగా అధిక మరణాలు సంభవించాయి. ఎరిత్రోసైట్లలో మైక్రోన్యూక్లియై (MN) మరియు కేంద్రక అసాధారణతలు ఉండటమే దీనికి సాక్ష్యం. MN ఏర్పడటం మైటోసిస్‌లో లోపాలను సూచిస్తుంది మరియు ఇది మైక్రోట్యూబ్యూల్స్‌కు క్రోమోజోమ్‌ల బలహీనమైన బంధం, క్రోమోజోమ్ గ్రహణ మరియు రవాణాకు బాధ్యత వహించే ప్రోటీన్ కాంప్లెక్స్‌లలో లోపాలు, క్రోమోజోమ్ విభజనలో లోపాలు మరియు DNA నష్టం మరమ్మత్తులో లోపాలతో సంబంధం కలిగి ఉంటుంది38,39 మరియు పురుగుమందుల ప్రేరిత ఆక్సిడేటివ్ ఒత్తిడికి సంబంధించినది కావచ్చు40,41. మూల్యాంకనం చేసిన అన్ని గాఢతలలో ఇతర అసాధారణతలు గమనించబడ్డాయి. సైపర్‌మెత్రిన్ గాఢతలను పెంచడం వల్ల ఎరిత్రోసైట్లలో కేంద్రక అసాధారణతలు అత్యల్ప (1 μg/L) మరియు అత్యధిక (20 μg/L) మోతాదులలో వరుసగా 5% మరియు 20% పెరిగాయి. ఉదాహరణకు, ఒక జాతి యొక్క DNA లో మార్పులు స్వల్పకాలిక మరియు దీర్ఘకాలిక మనుగడపై తీవ్రమైన పరిణామాలను కలిగిస్తాయి, ఫలితంగా జనాభా క్షీణత, పునరుత్పత్తి సామర్థ్యంలో మార్పులు, అంతర్-ప్రజననం, జన్యు వైవిధ్యం కోల్పోవడం మరియు వలస రేట్లలో మార్పులు సంభవిస్తాయి. ఈ కారకాలన్నీ జాతుల మనుగడ మరియు నిర్వహణపై ప్రభావం చూపుతాయి42,43. ఎరిథ్రాయిడ్ అసాధారణతలు ఏర్పడటం సైటోకైనేసిస్‌లో అవరోధాన్ని సూచిస్తుంది, దీని ఫలితంగా అసాధారణ కణ విభజన (ద్వికేంద్రక ఎరిథ్రోసైట్లు) జరుగుతుంది44,45; బహుళ-లోబ్డ్ కేంద్రకాలు అనేవి కేంద్రక త్వచం నుండి అనేక లోబ్‌లతో బయటకు పొడుచుకు వచ్చిన భాగాలు46, కాగా ఇతర ఎరిథ్రాయిడ్ అసాధారణతలు, కేంద్రక కిడ్నీలు/బ్లెబ్స్ వంటివి, DNA విస్తరణతో సంబంధం కలిగి ఉండవచ్చు47. కేంద్రకం లేని ఎరిథ్రోసైట్ల ఉనికి ఆక్సిజన్ రవాణాలో లోపాన్ని సూచిస్తుంది, ముఖ్యంగా కలుషితమైన నీటిలో48,49. అపోప్టోసిస్ కణ మరణాన్ని సూచిస్తుంది50.
ఇతర అధ్యయనాలు కూడా సైపర్‌మెత్రిన్ యొక్క జన్యువిష ప్రభావాలను ప్రదర్శించాయి. కబానా మరియు ఇతరులు51, ఒడోంటోఫ్రైనస్ అమెరికానస్ కణాలను 96 గంటల పాటు అధిక సాంద్రతలలో (5000 మరియు 10,000 μg L−1) సైపర్‌మెత్రిన్‌కు గురిచేసిన తర్వాత, వాటిలో మైక్రోన్యూక్లియై మరియు ద్వికేంద్రక కణాలు, అపోప్టోటిక్ కణాల వంటి కేంద్రక మార్పుల ఉనికిని ప్రదర్శించారు. సైపర్‌మెత్రిన్-ప్రేరిత అపోప్టోసిస్ P. బిలిగోనిగెరస్52 మరియు రినెల్లా అరేనారమ్53 లలో కూడా గుర్తించబడింది. ఈ ఫలితాలు సైపర్‌మెత్రిన్ అనేక రకాల జలజీవులపై జన్యువిష ప్రభావాలను కలిగి ఉందని మరియు MN మరియు ENA పరీక్ష ఉభయచరాలపై ఉప-ప్రాణాంతక ప్రభావాలకు సూచికగా ఉండవచ్చని, అలాగే విషపదార్థాలకు గురైన స్థానిక జాతులు మరియు వన్య జనాభాకు ఇది వర్తించవచ్చని సూచిస్తున్నాయి12.
సైపర్‌మెత్రిన్ యొక్క వాణిజ్య ఫార్ములేషన్లు అధిక పర్యావరణ ప్రమాదాన్ని (తీవ్రమైన మరియు దీర్ఘకాలిక రెండూ) కలిగిస్తాయి, వీటి HQలు US ఎన్విరాన్‌మెంటల్ ప్రొటెక్షన్ ఏజెన్సీ (EPA) స్థాయి54ను మించి ఉంటాయి, ఇవి పర్యావరణంలో ఉన్నట్లయితే ఆ జాతిపై ప్రతికూల ప్రభావం చూపవచ్చు. దీర్ఘకాలిక ప్రమాద అంచనాలో, మరణానికి NOEC 3 μg L−1గా ఉంది, ఇది నీటిలో కనిపించే గాఢతలు ఆ జాతికి ప్రమాదాన్ని కలిగించవచ్చని నిర్ధారిస్తుంది55. ఎండోసల్ఫాన్ మరియు సైపర్‌మెత్రిన్ మిశ్రమానికి గురైన R. arenarum లార్వాలకు 168 గంటల తర్వాత ప్రాణాంతక NOEC 500 μg L−1గా ఉంది; ఈ విలువ 336 గంటల తర్వాత 0.0005 μg L−1కి తగ్గింది. ఎక్స్‌పోజర్ ఎంత ఎక్కువైతే, ఆ జాతికి హాని కలిగించే గాఢతలు అంత తక్కువగా ఉంటాయని రచయితలు చూపిస్తున్నారు. అదే ఎక్స్‌పోజర్ సమయంలో P. gracilis కంటే NOEC విలువలు ఎక్కువగా ఉన్నాయని హైలైట్ చేయడం కూడా ముఖ్యం, ఇది సైపర్‌మెత్రిన్‌కు జాతి ప్రతిస్పందన జాతి-నిర్దిష్టమైనదని సూచిస్తుంది. ఇంకా, మరణాల పరంగా చూస్తే, సైపర్‌మెత్రిన్‌కు గురైన తర్వాత పి. గ్రాసిలిస్ యొక్క CHQ విలువ 64.67కి చేరుకుంది, ఇది US ఎన్విరాన్‌మెంటల్ ప్రొటెక్షన్ ఏజెన్సీ54 నిర్దేశించిన సూచన విలువ కంటే ఎక్కువ. అలాగే, ఆర్. అరేనారమ్ లార్వా యొక్క CHQ విలువ కూడా ఈ విలువ కంటే ఎక్కువగా ఉంది (336 గంటల తర్వాత CHQ > 388.00). ఇది, అధ్యయనం చేయబడిన పురుగుమందులు అనేక ఉభయచర జాతులకు అధిక ప్రమాదాన్ని కలిగిస్తున్నాయని సూచిస్తుంది. పి. గ్రాసిలిస్ రూపాంతరం పూర్తి చేయడానికి సుమారు 30 రోజులు పడుతుందని56 పరిగణనలోకి తీసుకుంటే, అధ్యయనం చేయబడిన సైపర్‌మెత్రిన్ గాఢతలు, సోకిన జీవులు చిన్న వయస్సులోనే వయోజన లేదా పునరుత్పత్తి దశలోకి ప్రవేశించకుండా నిరోధించడం ద్వారా వాటి జనాభా క్షీణతకు దోహదపడతాయని నిర్ధారించవచ్చు.
మైక్రోన్యూక్లియై మరియు ఇతర ఎరిత్రోసైట్ కేంద్రక అసాధారణతల యొక్క లెక్కించబడిన ప్రమాద అంచనాలో, CHQ విలువలు 14.92 నుండి 97.00 వరకు ఉన్నాయి, ఇది సైపర్‌మెత్రిన్ దాని సహజ ఆవాసంలో కూడా P. గ్రాసిలిస్‌కు జన్యువిషపూరిత ప్రమాదాన్ని కలిగించే సామర్థ్యాన్ని కలిగి ఉందని సూచిస్తుంది. మరణాలను పరిగణనలోకి తీసుకుంటే, P. గ్రాసిలిస్ తట్టుకోగల జెనోబయోటిక్ సమ్మేళనాల గరిష్ట సాంద్రత 4.24 μg L−1గా ఉంది. అయితే, 1 μg/L అంత తక్కువ సాంద్రతలు కూడా జన్యువిషపూరిత ప్రభావాలను చూపించాయి. ఈ వాస్తవం అసాధారణ జీవుల సంఖ్య పెరగడానికి57 దారితీయవచ్చు మరియు వాటి ఆవాసాలలో జాతుల అభివృద్ధి మరియు పునరుత్పత్తిని ప్రభావితం చేసి, ఉభయచర జనాభా క్షీణతకు కారణం కావచ్చు.
సైపర్‌మెత్రిన్ అనే కీటకనాశిని యొక్క వాణిజ్య ఫార్ములేషన్లు పి. గ్రాసిలిస్‌పై అధిక తీవ్ర మరియు దీర్ఘకాలిక విష ప్రభావాన్ని చూపించాయి. మైక్రోన్యూక్లియై మరియు ఎరిత్రోసైట్ కేంద్రక అసాధారణతలు, ముఖ్యంగా సెర్రేటెడ్ న్యూక్లియై, లోబ్డ్ న్యూక్లియై మరియు వెసిక్యులర్ న్యూక్లియై ఉండటం ద్వారా విష ప్రభావాల కారణంగా అధిక మరణాల రేట్లు గమనించబడ్డాయి. అదనంగా, అధ్యయనం చేయబడిన జాతి తీవ్ర మరియు దీర్ఘకాలిక పర్యావరణ ప్రమాదాలను పెంచుకుంది. ఈ డేటా, మా పరిశోధన బృందం చేసిన మునుపటి అధ్యయనాలతో కలిపి, సైపర్‌మెత్రిన్ యొక్క విభిన్న వాణిజ్య ఫార్ములేషన్లు కూడా అసిటైల్‌కోలినెస్టరేస్ (AChE) మరియు బ్యూటైరైల్‌కోలినెస్టరేస్ (BChE) కార్యకలాపాలను తగ్గించాయని మరియు ఆక్సీకరణ ఒత్తిడిని58 కలిగించాయని, మరియు పి. గ్రాసిలిస్‌లో ఈత కార్యకలాపాలలో మార్పులు మరియు నోటి వైకల్యాలకు59 దారితీశాయని చూపించాయి, ఇది సైపర్‌మెత్రిన్ యొక్క వాణిజ్య ఫార్ములేషన్లు ఈ జాతికి అధిక ప్రాణాంతక మరియు ఉప-ప్రాణాంతక విష ప్రభావాన్ని కలిగి ఉన్నాయని సూచిస్తుంది. హార్ట్‌మాన్ మరియు ఇతరులు. తొమ్మిది ఇతర పురుగుమందులతో పోల్చినప్పుడు, సైపర్‌మెత్రిన్ యొక్క వాణిజ్య ఫార్ములేషన్‌లు పి. గ్రాసిలిస్ మరియు అదే జాతికి చెందిన మరొక జాతి (పి. కువియెరి) లకు అత్యంత విషపూరితమైనవని 60వ అధ్యయనం కనుగొంది. పర్యావరణ పరిరక్షణ కోసం చట్టబద్ధంగా ఆమోదించబడిన సైపర్‌మెత్రిన్ గాఢతలు అధిక మరణాలకు మరియు దీర్ఘకాలిక జనాభా క్షీణతకు దారితీయవచ్చని ఇది సూచిస్తుంది.
ఉభయచరాలపై పురుగుమందు యొక్క విష ప్రభావాన్ని అంచనా వేయడానికి మరిన్ని అధ్యయనాలు అవసరం, ఎందుకంటే పర్యావరణంలో కనిపించే గాఢతలు అధిక మరణాలకు కారణం కావచ్చు మరియు పి. గ్రాసిలిస్‌కు సంభావ్య ప్రమాదాన్ని కలిగించవచ్చు. ఉభయచర జాతులపై పరిశోధనను ప్రోత్సహించాలి, ఎందుకంటే ఈ జీవులపై, ముఖ్యంగా బ్రెజిలియన్ జాతులపై సమాచారం చాలా తక్కువగా ఉంది.
దీర్ఘకాలిక విష పరీక్ష స్థిర పరిస్థితులలో 168 గంటలు (7 రోజులు) కొనసాగింది మరియు ఉప-ప్రాణాంతక గాఢతలు: 1, 3, 6 మరియు 20 μg ai L−1 గా ఉన్నాయి. రెండు ప్రయోగాలలో, ప్రతి చికిత్సా సమూహానికి 10 కప్పపిల్లలను ఆరు పునరావృత్తులతో మూల్యాంకనం చేశారు, తద్వారా ప్రతి గాఢతకు మొత్తం 60 కప్పపిల్లలు అయ్యాయి. అదే సమయంలో, కేవలం నీటితో చేసిన చికిత్స ప్రతికూల నియంత్రణగా పనిచేసింది. ప్రతి ప్రయోగాత్మక అమరికలో 500 ml సామర్థ్యం గల ఒక క్రిమిరహిత గాజు పాత్ర మరియు ప్రతి 50 ml ద్రావణానికి 1 కప్పపిల్ల సాంద్రత ఉన్నాయి. బాష్పీభవనాన్ని నివారించడానికి ఫ్లాస్క్‌ను పాలిథిలిన్ ఫిల్మ్‌తో కప్పి, నిరంతరం గాలిని అందించారు.
0, 96, మరియు 168 గంటల వద్ద పురుగుమందుల గాఢతలను నిర్ధారించడానికి నీటిని రసాయనికంగా విశ్లేషించారు. సాబిన్ మరియు ఇతరులు 68 మరియు మార్టిన్స్ మరియు ఇతరులు 69 ప్రకారం, ఫెడరల్ యూనివర్శిటీ ఆఫ్ శాంటా మారియా యొక్క పురుగుమందుల విశ్లేషణ ప్రయోగశాల (LARP)లో ట్రిపుల్ క్వాడ్రుపోల్ మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ (వేరియన్ మోడల్ 1200, పాలో ఆల్టో, కాలిఫోర్నియా, USA)తో అనుసంధానించబడిన గ్యాస్ క్రోమాటోగ్రఫీని ఉపయోగించి ఈ విశ్లేషణలు జరిపారు. నీటిలో పురుగుమందుల పరిమాణాత్మక నిర్ధారణ అనుబంధ సామగ్రిగా (పట్టిక SM1) చూపబడింది.
మైక్రోన్యూక్లియస్ పరీక్ష (MNT) మరియు ఎర్ర రక్త కణ కేంద్రక అసాధారణత పరీక్ష (RNA) కోసం, ప్రతి చికిత్సా సమూహం నుండి 15 కప్ప పిల్లలను విశ్లేషించారు. కప్ప పిల్లలకు 5% లిడోకైన్ (50 mg g-170) తో మత్తు ఇచ్చి, పారవేయగలిగే హెపారినైజ్డ్ సిరంజిలను ఉపయోగించి గుండె నుండి రక్త నమూనాలను సేకరించారు. శుభ్రమైన మైక్రోస్కోప్ స్లైడ్‌లపై రక్తపు పూతలను తయారు చేసి, గాలిలో ఆరబెట్టి, 100% మెథనాల్ (4 °C) తో 2 నిమిషాల పాటు స్థిరీకరించి, ఆపై చీకటిలో 15 నిమిషాల పాటు 10% గీమ్సా ద్రావణంతో రంగు వేశారు. ప్రక్రియ చివరిలో, అదనపు రంగును తొలగించడానికి స్లైడ్‌లను స్వేదన జలంతో కడిగి, గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద ఆరబెట్టారు.
MN మరియు ENA ఉనికిని నిర్ధారించడానికి, ప్రతి టాడ్‌పోల్ నుండి కనీసం 1000 RBCలను 71 ఆబ్జెక్టివ్‌తో 100× మైక్రోస్కోప్‌ను ఉపయోగించి విశ్లేషించారు. సైపర్‌మెత్రిన్ గాఢతలు మరియు నియంత్రణలను పరిగణనలోకి తీసుకుని, టాడ్‌పోల్స్ నుండి మొత్తం 75,796 RBCలను మూల్యాంకనం చేశారు. కారాస్కో మరియు ఇతరులు, మరియు ఫెనెచ్ మరియు ఇతరులు38,72 పద్ధతి ప్రకారం, ఈ క్రింది కేంద్రక గాయాల సంభవాన్ని నిర్ధారించడం ద్వారా జన్యువిషత్వాన్ని విశ్లేషించారు: (1) కేంద్రకరహిత కణాలు: కేంద్రకాలు లేని కణాలు; (2) అపోప్టోటిక్ కణాలు: కేంద్రక విచ్ఛిన్నం, ప్రోగ్రామ్ చేయబడిన కణ మరణం; (3) ద్వికేంద్రక కణాలు: రెండు కేంద్రకాలు ఉన్న కణాలు; (4) కేంద్రక మొగ్గలు లేదా బ్లెబ్ కణాలు: కేంద్రక త్వచం యొక్క చిన్న ఉబ్బెత్తులతో కూడిన కేంద్రకాలు, మైక్రోన్యూక్లియై పరిమాణంలో ఉండే బ్లెబ్‌లు; (5) కారియోలైజ్డ్ కణాలు: అంతర్గత పదార్థం లేకుండా కేంద్రకం యొక్క ఆకృతి మాత్రమే ఉన్న కణాలు; (6) గీతలు గల కణాలు: వాటి ఆకారంలో స్పష్టమైన పగుళ్లు లేదా గీతలు ఉన్న కేంద్రకాలు గల కణాలు, వీటిని మూత్రపిండ ఆకారపు కేంద్రకాలు అని కూడా అంటారు; (7) లోబులేటెడ్ కణాలు: పైన పేర్కొన్న వెసికిల్స్ కంటే పెద్ద కేంద్రక ఉబ్బెత్తులు గల కణాలు; మరియు (8) మైక్రోకణాలు: సంక్షిప్త కేంద్రకాలు మరియు తగ్గిన సైటోప్లాజం గల కణాలు. ఈ మార్పులను నెగటివ్ కంట్రోల్ ఫలితాలతో పోల్చారు.
తీవ్ర విష పరీక్ష ఫలితాలను (LC50) GBasic సాఫ్ట్‌వేర్ మరియు TSK-ట్రిమ్డ్ స్పియర్‌మన్-కార్బర్ పద్ధతి74 ఉపయోగించి విశ్లేషించారు. దీర్ఘకాలిక పరీక్ష డేటాను దోష సాధారణత (షాపిరో-విల్క్స్) మరియు వైవిధ్య సజాతీయత (బార్ట్‌లెట్) కోసం ముందుగా పరీక్షించారు. ఫలితాలను వన్-వే అనాలిసిస్ ఆఫ్ వేరియెన్స్ (ANOVA) ఉపయోగించి విశ్లేషించారు. డేటాను వాటిలో వాటిని పోల్చడానికి ట్యూకీ పరీక్షను, మరియు చికిత్స సమూహం మరియు ప్రతికూల నియంత్రణ సమూహం మధ్య డేటాను పోల్చడానికి డన్నెట్ పరీక్షను ఉపయోగించారు.
LOEC మరియు NOEC డేటాను డన్నెట్ పరీక్షను ఉపయోగించి విశ్లేషించారు. 95% ప్రాముఖ్యత స్థాయి (p < 0.05)తో స్టాటిస్టికా 8.0 సాఫ్ట్‌వేర్ (స్టాట్‌సాఫ్ట్) ఉపయోగించి గణాంక పరీక్షలు నిర్వహించబడ్డాయి.