చిన్న నీటి టాడ్‌పోల్‌లకు వాణిజ్య సైపర్‌మెత్రిన్ తయారీల మరణం మరియు విషపూరితం.

ఈ అధ్యయనం వాణిజ్య ఉత్పత్తుల యొక్క ప్రాణాంతకత, ప్రాణాంతకత మరియు విషపూరితతను అంచనా వేసింది.సైపర్‌మెత్రిన్అనురాన్ టాడ్‌పోల్స్‌కు సూత్రీకరణలు. తీవ్రమైన పరీక్షలో, 96 గంటలకు 100–800 μg/L సాంద్రతలను పరీక్షించారు. దీర్ఘకాలిక పరీక్షలో, సహజంగా సంభవించే సైపర్‌మెత్రిన్ సాంద్రతలు (1, 3, 6, మరియు 20 μg/L) మరణాల కోసం పరీక్షించబడ్డాయి, తరువాత మైక్రోన్యూక్లియస్ పరీక్ష మరియు ఎర్ర రక్త కణ అణు అసాధారణతలు 7 రోజుల పాటు జరిగాయి. టాడ్‌పోల్స్‌కు వాణిజ్య సైపర్‌మెత్రిన్ సూత్రీకరణ యొక్క LC50 273.41 μg L−1. దీర్ఘకాలిక పరీక్షలో, అత్యధిక సాంద్రత (20 μg L−1) 50% కంటే ఎక్కువ మరణాలకు దారితీసింది, ఎందుకంటే ఇది పరీక్షించబడిన టాడ్‌పోల్స్‌లో సగం మందిని చంపింది. మైక్రోన్యూక్లియస్ పరీక్ష 6 మరియు 20 μg L−1 వద్ద గణనీయమైన ఫలితాలను చూపించింది మరియు అనేక అణు అసాధారణతలు కనుగొనబడ్డాయి, వాణిజ్య సైపర్‌మెత్రిన్ సూత్రీకరణ P. గ్రాసిలిస్‌కు వ్యతిరేకంగా జెనోటాక్సిక్ సామర్థ్యాన్ని కలిగి ఉందని సూచిస్తుంది. ఈ జాతికి సైపర్‌మెత్రిన్ అధిక ప్రమాదం, ఇది స్వల్ప మరియు దీర్ఘకాలికంగా బహుళ సమస్యలను కలిగిస్తుందని మరియు ఈ పర్యావరణ వ్యవస్థ యొక్క గతిశీలతను ప్రభావితం చేస్తుందని సూచిస్తుంది. అందువల్ల, వాణిజ్య సైపర్‌మెత్రిన్ సూత్రీకరణలు పి. గ్రాసిలిస్‌పై విషపూరిత ప్రభావాలను కలిగి ఉన్నాయని నిర్ధారించవచ్చు.
వ్యవసాయ కార్యకలాపాల నిరంతర విస్తరణ మరియు విస్తారమైన వాడకం కారణంగాతెగులు నియంత్రణనీటి జంతువులు తరచుగా పురుగుమందులకు గురవుతాయి1,2. వ్యవసాయ క్షేత్రాల సమీపంలో నీటి వనరుల కాలుష్యం ఉభయచరాలు వంటి లక్ష్యం కాని జీవుల అభివృద్ధి మరియు మనుగడను ప్రభావితం చేస్తుంది.
పర్యావరణ మాత్రికల అంచనాలో ఉభయచరాలు మరింత ముఖ్యమైనవిగా మారుతున్నాయి. సంక్లిష్ట జీవిత చక్రాలు, వేగవంతమైన లార్వా వృద్ధి రేట్లు, ట్రోఫిక్ స్థితి, పారగమ్య చర్మం 10,11, పునరుత్పత్తి కోసం నీటిపై ఆధారపడటం 12 మరియు అసురక్షిత గుడ్లు 11,13,14 వంటి ప్రత్యేక లక్షణాల కారణంగా అనురాన్‌లను పర్యావరణ కాలుష్య కారకాలకు మంచి బయోఇండికేటర్‌లుగా పరిగణిస్తారు. సాధారణంగా ఏడుపు కప్ప అని పిలువబడే చిన్న నీటి కప్ప (ఫిసలేమస్ గ్రాసిలిస్), పురుగుమందుల కాలుష్యం యొక్క బయోఇండికేటర్ జాతిగా చూపబడింది 4,5,6,7,15. ఈ జాతి అర్జెంటీనా, ఉరుగ్వే, పరాగ్వే మరియు బ్రెజిల్‌లలో నిలబడి ఉన్న జలాలు, రక్షిత ప్రాంతాలు లేదా వేరియబుల్ ఆవాసాలు ఉన్న ప్రాంతాలలో కనిపిస్తుంది 1617 మరియు వివిధ ఆవాసాల విస్తృత పంపిణీ మరియు సహనం కారణంగా IUCN వర్గీకరణ ద్వారా స్థిరంగా పరిగణించబడుతుంది 18.
సైపర్‌మెత్రిన్‌కు గురైన తర్వాత ఉభయచరాలలో ప్రాణాంతక ప్రభావాలు నివేదించబడ్డాయి, వీటిలో టాడ్‌పోల్స్‌లో ప్రవర్తనా, పదనిర్మాణ మరియు జీవరసాయన మార్పులు23,24,25, మరణాలు మరియు రూపాంతర సమయం మారడం, ఎంజైమాటిక్ మార్పులు, పొదిగే విజయం తగ్గడం24,25, హైపర్యాక్టివిటీ26, కోలినెస్టెరేస్ కార్యకలాపాల నిరోధం27 మరియు ఈత పనితీరులో మార్పులు7,28 ఉన్నాయి. అయితే, ఉభయచరాలలో సైపర్‌మెత్రిన్ యొక్క జెనోటాక్సిక్ ప్రభావాల అధ్యయనాలు పరిమితం. అందువల్ల, అనురాన్ జాతుల సైపర్‌మెత్రిన్‌కు గ్రహణశీలతను అంచనా వేయడం ముఖ్యం.
పర్యావరణ కాలుష్యం ఉభయచరాల సాధారణ పెరుగుదల మరియు అభివృద్ధిని ప్రభావితం చేస్తుంది, కానీ అత్యంత తీవ్రమైన ప్రతికూల ప్రభావం పురుగుమందుల బహిర్గతం వల్ల DNA కి జన్యుపరమైన నష్టం జరుగుతుంది. రక్త కణ స్వరూప విశ్లేషణ కాలుష్యం మరియు అడవి జాతులకు ఒక పదార్ధం యొక్క సంభావ్య విషపూరితం యొక్క ముఖ్యమైన బయోఇండికేటర్29. మైక్రోన్యూక్లియస్ పరీక్ష పర్యావరణంలో రసాయనాల జన్యు విషపూరితతను నిర్ణయించడానికి సాధారణంగా ఉపయోగించే పద్ధతుల్లో ఒకటి30. ఇది వేగవంతమైన, ప్రభావవంతమైన మరియు చవకైన పద్ధతి, ఇది ఉభయచరాలు31,32 వంటి జీవుల రసాయన కాలుష్యానికి మంచి సూచికగా ఉంటుంది మరియు జన్యు విషపూరిత కాలుష్య కారకాలకు గురికావడంపై సమాచారాన్ని అందించగలదు33.
ఈ అధ్యయనం యొక్క లక్ష్యం మైక్రోన్యూక్లియస్ పరీక్ష మరియు పర్యావరణ ప్రమాద అంచనాను ఉపయోగించి చిన్న జల టాడ్‌పోల్‌లకు వాణిజ్య సైపర్‌మెత్రిన్ సూత్రీకరణల విష సామర్థ్యాన్ని అంచనా వేయడం.
పరీక్ష యొక్క తీవ్రమైన కాలంలో వాణిజ్య సైపర్‌మెత్రిన్ యొక్క వివిధ సాంద్రతలకు గురైన పి. గ్రాసిలిస్ టాడ్‌పోల్స్ యొక్క సంచిత మరణాలు (%).
దీర్ఘకాలిక పరీక్ష సమయంలో వాణిజ్య సైపర్‌మెత్రిన్ యొక్క వివిధ సాంద్రతలకు గురైన పి. గ్రాసిలిస్ టాడ్‌పోల్స్ యొక్క సంచిత మరణాలు (%).
వివిధ సాంద్రతలలో సైపర్‌మెత్రిన్ (6 మరియు 20 μg/L) కు గురైన ఉభయచరాలలో జెనోటాక్సిక్ ప్రభావాల ఫలితంగా అధిక మరణాలు సంభవించాయి, దీనికి మైక్రోన్యూక్లియైలు (MN) మరియు ఎర్ర రక్త కణాలలో న్యూక్లియర్ అసాధారణతలు ఉండటం రుజువు చేసింది. MN ఏర్పడటం మైటోసిస్‌లో లోపాలను సూచిస్తుంది మరియు క్రోమోజోమ్‌లను మైక్రోట్యూబ్యూల్స్‌కు బంధించడంలో పేలవంగా ఉండటం, క్రోమోజోమ్ తీసుకోవడం మరియు రవాణాకు కారణమైన ప్రోటీన్ కాంప్లెక్స్‌లలో లోపాలు, క్రోమోజోమ్ విభజనలో లోపాలు మరియు DNA నష్టం మరమ్మత్తులో లోపాలు 38,39 మరియు పురుగుమందుల ప్రేరిత ఆక్సీకరణ ఒత్తిడికి సంబంధించినవి కావచ్చు 40,41. మూల్యాంకనం చేయబడిన అన్ని సాంద్రతలలో ఇతర అసాధారణతలు గమనించబడ్డాయి. సైపర్‌మెత్రిన్ సాంద్రతలను పెంచడం వల్ల ఎర్ర రక్త కణాలలో అణు అసాధారణతలు వరుసగా 5% మరియు 20% అత్యల్ప (1 μg/L) మరియు అత్యధిక (20 μg/L) మోతాదులలో పెరిగాయి. ఉదాహరణకు, ఒక జాతి యొక్క DNAలో మార్పులు స్వల్ప మరియు దీర్ఘకాలిక మనుగడకు తీవ్రమైన పరిణామాలను కలిగిస్తాయి, ఫలితంగా జనాభా క్షీణత, పునరుత్పత్తి ఫిట్‌నెస్‌లో మార్పు, సంతానోత్పత్తి, జన్యు వైవిధ్యం కోల్పోవడం మరియు వలస రేట్లు మారతాయి. ఈ కారకాలన్నీ జాతుల మనుగడ మరియు నిర్వహణను ప్రభావితం చేస్తాయి42,43. ఎరిథ్రాయిడ్ అసాధారణతలు ఏర్పడటం సైటోకినిసిస్‌లో ఒక బ్లాక్‌ను సూచిస్తుంది, దీని ఫలితంగా అసాధారణ కణ విభజన (బైన్యూక్లియేటెడ్ ఎరిథ్రోసైట్లు)44,45 జరుగుతుంది; మల్టీలోబ్డ్ న్యూక్లియైలు బహుళ లోబ్‌లతో న్యూక్లియర్ పొర యొక్క ప్రోట్రూషన్‌లు46, అయితే ఇతర ఎరిథ్రాయిడ్ అసాధారణతలు న్యూక్లియర్ కిడ్నీలు/బ్లెబ్‌లు47 వంటి DNA విస్తరణతో సంబంధం కలిగి ఉండవచ్చు. న్యూక్లియర్ ఎరిథ్రోసైట్‌ల ఉనికి బలహీనమైన ఆక్సిజన్ రవాణాను సూచిస్తుంది, ముఖ్యంగా కలుషితమైన నీటిలో48,49. అపోప్టోసిస్ కణాల మరణాన్ని సూచిస్తుంది50.
ఇతర అధ్యయనాలు కూడా సైపర్‌మెత్రిన్ యొక్క జన్యుసంబంధ ప్రభావాలను ప్రదర్శించాయి. కబానా మరియు ఇతరులు.51 96 గంటల పాటు అధిక సాంద్రత కలిగిన సైపర్‌మెత్రిన్ (5000 మరియు 10,000 μg L−1) కు గురైన తర్వాత ఓడోంటోఫ్రైనస్ అమెరికనస్ కణాలలో బైన్యూక్లియేటెడ్ కణాలు మరియు అపోప్టోటిక్ కణాలు వంటి సూక్ష్మ కేంద్రకాలు మరియు అణు మార్పుల ఉనికిని ప్రదర్శించారు. సైపర్‌మెత్రిన్-ప్రేరిత అపోప్టోసిస్ P. బిలిగోనిగెరస్52 మరియు రైనెల్లా అరేనరమ్53 లలో కూడా కనుగొనబడింది. ఈ ఫలితాలు సైపర్‌మెత్రిన్ వివిధ రకాల జల జీవులపై జన్యుసంబంధ ప్రభావాలను కలిగి ఉందని మరియు MN మరియు ENA పరీక్ష ఉభయచరాలపై ప్రాణాంతక ప్రభావాలకు సూచికగా ఉండవచ్చని మరియు స్థానిక జాతులు మరియు విషపూరిత పదార్థాలకు గురైన అడవి జనాభాకు వర్తించవచ్చని సూచిస్తున్నాయి12.
సైపర్‌మెత్రిన్ యొక్క వాణిజ్య సూత్రీకరణలు అధిక పర్యావరణ ప్రమాదాన్ని కలిగిస్తాయి (తీవ్రమైన మరియు దీర్ఘకాలికమైనవి రెండూ), HQలు US పర్యావరణ పరిరక్షణ సంస్థ (EPA) స్థాయిని మించిపోయాయి54, ఇవి పర్యావరణంలో ఉంటే జాతులను ప్రతికూలంగా ప్రభావితం చేస్తాయి. దీర్ఘకాలిక ప్రమాద అంచనాలో, మరణాలకు సంబంధించిన NOEC 3 μg L−1, నీటిలో కనిపించే సాంద్రతలు జాతులకు ప్రమాదాన్ని కలిగిస్తాయని నిర్ధారిస్తుంది55. ఎండోసల్ఫాన్ మరియు సైపర్‌మెత్రిన్ మిశ్రమానికి గురైన R. అరేనరమ్ లార్వాకు ప్రాణాంతకమైన NOEC 168 గంటల తర్వాత 500 μg L−1; ఈ విలువ 336 గంటల తర్వాత 0.0005 μg L−1కి తగ్గింది. ఎక్కువసేపు బహిర్గతం అయితే, జాతులకు హానికరమైన సాంద్రతలు తక్కువగా ఉంటాయని రచయితలు చూపిస్తున్నారు. అదే ఎక్స్‌పోజర్ సమయంలో P. గ్రాసిలిస్ కంటే NOEC విలువలు ఎక్కువగా ఉన్నాయని హైలైట్ చేయడం కూడా ముఖ్యం, ఇది సైపర్‌మెత్రిన్‌కు జాతుల ప్రతిస్పందన జాతుల-నిర్దిష్టమని సూచిస్తుంది. ఇంకా, మరణాల పరంగా, సైపర్‌మెత్రిన్‌కు గురైన తర్వాత P. గ్రాసిలిస్ యొక్క CHQ విలువ 64.67కి చేరుకుంది, ఇది US ఎన్విరాన్‌మెంటల్ ప్రొటెక్షన్ ఏజెన్సీ54 నిర్దేశించిన రిఫరెన్స్ విలువ కంటే ఎక్కువ, మరియు R. అరేనారమ్ లార్వా యొక్క CHQ విలువ కూడా ఈ విలువ కంటే ఎక్కువగా ఉంది (CHQ > 336 h తర్వాత 388.00), ఇది అధ్యయనం చేయబడిన పురుగుమందులు అనేక ఉభయచర జాతులకు అధిక ప్రమాదాన్ని కలిగిస్తాయని సూచిస్తుంది. P. గ్రాసిలిస్‌కు మెటామార్ఫోసిస్ పూర్తి చేయడానికి సుమారు 30 రోజులు అవసరమని పరిగణనలోకి తీసుకుంటే, సైపర్‌మెత్రిన్ యొక్క అధ్యయనం చేయబడిన సాంద్రతలు సోకిన వ్యక్తులు చిన్న వయస్సులోనే వయోజన లేదా పునరుత్పత్తి దశలోకి ప్రవేశించకుండా నిరోధించడం ద్వారా జనాభా క్షీణతకు దోహదం చేస్తాయని నిర్ధారించవచ్చు.
మైక్రోన్యూక్లియైలు మరియు ఇతర ఎరిథ్రోసైట్ న్యూక్లియర్ అసాధారణతల యొక్క లెక్కించిన ప్రమాద అంచనాలో, CHQ విలువలు 14.92 నుండి 97.00 వరకు ఉన్నాయి, ఇది సైపర్‌మెత్రిన్ దాని సహజ ఆవాసాలలో కూడా P. గ్రాసిలిస్‌కు సంభావ్య జెనోటాక్సిక్ ప్రమాదాన్ని కలిగి ఉందని సూచిస్తుంది. మరణాలను పరిగణనలోకి తీసుకుంటే, P. గ్రాసిలిస్‌కు తట్టుకోగల జెనోబయోటిక్ సమ్మేళనాల గరిష్ట సాంద్రత 4.24 μg L−1. అయితే, 1 μg/L కంటే తక్కువ సాంద్రతలు కూడా జెనోటాక్సిక్ ప్రభావాలను చూపించాయి. ఈ వాస్తవం అసాధారణ వ్యక్తుల సంఖ్య పెరుగుదలకు దారితీయవచ్చు57 మరియు వాటి ఆవాసాలలో జాతుల అభివృద్ధి మరియు పునరుత్పత్తిని ప్రభావితం చేస్తుంది, ఇది ఉభయచర జనాభాలో క్షీణతకు దారితీస్తుంది.
సైపర్‌మెత్రిన్ అనే క్రిమిసంహారక మందుల వాణిజ్య సూత్రీకరణలు పి. గ్రాసిలిస్‌కు అధిక తీవ్రమైన మరియు దీర్ఘకాలిక విషపూరితతను చూపించాయి. విషపూరిత ప్రభావాల వల్ల మరణాల రేటు ఎక్కువగా ఉండటం గమనించబడింది, దీనికి కారణం మైక్రోన్యూక్లియైలు మరియు ఎరిథ్రోసైట్ న్యూక్లియర్ అసాధారణతలు, ముఖ్యంగా సెరేటెడ్ న్యూక్లియైలు, లోబ్డ్ న్యూక్లియైలు మరియు వెసిక్యులర్ న్యూక్లియైలు ఉండటం. అదనంగా, అధ్యయనం చేయబడిన జాతులు తీవ్రమైన మరియు దీర్ఘకాలిక పర్యావరణ ప్రమాదాలను పెంచాయి. మా పరిశోధనా బృందం చేసిన మునుపటి అధ్యయనాలతో కలిపి ఈ డేటా, సైపర్‌మెత్రిన్ యొక్క వివిధ వాణిజ్య సూత్రీకరణలు కూడా ఎసిటైల్‌కోలినెస్టెరేస్ (AChE) మరియు బ్యూటైరిల్‌కోలినెస్టెరేస్ (BChE) కార్యకలాపాలు మరియు ఆక్సీకరణ ఒత్తిడిని తగ్గిస్తాయని మరియు పి. గ్రాసిలిస్‌లో ఈత కార్యకలాపాలు మరియు నోటి వైకల్యాలలో మార్పులకు దారితీశాయని, సైపర్‌మెత్రిన్ యొక్క వాణిజ్య సూత్రీకరణలు ఈ జాతికి అధిక ప్రాణాంతక మరియు ప్రాణాంతక విషపూరితతను కలిగి ఉన్నాయని సూచిస్తున్నాయి. హార్ట్‌మన్ మరియు ఇతరులు. 60 మంది సైపర్‌మెత్రిన్ యొక్క వాణిజ్య సూత్రీకరణలు తొమ్మిది ఇతర పురుగుమందులతో పోలిస్తే P. గ్రాసిలిస్ మరియు అదే జాతికి చెందిన మరొక జాతి (P. cuvieri) లకు అత్యంత విషపూరితమైనవని కనుగొన్నారు. పర్యావరణ పరిరక్షణ కోసం చట్టబద్ధంగా ఆమోదించబడిన సైపర్‌మెత్రిన్ సాంద్రతలు అధిక మరణాలకు మరియు దీర్ఘకాలిక జనాభా క్షీణతకు దారితీయవచ్చని ఇది సూచిస్తుంది.
వాతావరణంలో కనిపించే సాంద్రతలు అధిక మరణాలకు కారణమవుతాయి మరియు పి. గ్రాసిలిస్‌కు సంభావ్య ప్రమాదాన్ని కలిగిస్తాయి కాబట్టి, ఉభయచర జీవులకు పురుగుమందు యొక్క విషపూరితతను అంచనా వేయడానికి మరిన్ని అధ్యయనాలు అవసరం. ఉభయచర జాతులపై పరిశోధనను ప్రోత్సహించాలి, ఎందుకంటే ఈ జీవులపై డేటా చాలా తక్కువగా ఉంది, ముఖ్యంగా బ్రెజిలియన్ జాతులపై.
దీర్ఘకాలిక విషపూరిత పరీక్ష స్థిర పరిస్థితులలో 168 గంటలు (7 రోజులు) కొనసాగింది మరియు ప్రాణాంతక సాంద్రతలు: 1, 3, 6 మరియు 20 μg ai L−1. రెండు ప్రయోగాలలో, చికిత్స సమూహానికి 10 టాడ్‌పోల్‌లను ఆరు ప్రతిరూపాలతో మూల్యాంకనం చేశారు, మొత్తం గాఢతకు 60 టాడ్‌పోల్‌లు. ఇంతలో, నీరు-మాత్రమే చికిత్స ప్రతికూల నియంత్రణగా పనిచేసింది. ప్రతి ప్రయోగాత్మక సెటప్‌లో 500 ml సామర్థ్యం మరియు 50 ml ద్రావణానికి 1 టాడ్‌పోల్ సాంద్రత కలిగిన స్టెరైల్ గాజు డిష్ ఉంటుంది. బాష్పీభవనాన్ని నివారించడానికి ఫ్లాస్క్‌ను పాలిథిలిన్ ఫిల్మ్‌తో కప్పారు మరియు నిరంతరం గాలిలో ఉంచారు.
0, 96, మరియు 168 గంటలలో పురుగుమందుల సాంద్రతలను నిర్ణయించడానికి నీటిని రసాయనికంగా విశ్లేషించారు. సబిన్ మరియు ఇతరులు 68 మరియు మార్టిన్స్ మరియు ఇతరులు 69 ప్రకారం, ట్రిపుల్ క్వాడ్రూపోల్ మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ (వేరియన్ మోడల్ 1200, పాలో ఆల్టో, కాలిఫోర్నియా, USA) తో కలిపి గ్యాస్ క్రోమాటోగ్రఫీని ఉపయోగించి శాంటా మారియా ఫెడరల్ విశ్వవిద్యాలయంలోని పురుగుమందుల విశ్లేషణ ప్రయోగశాల (LARP)లో విశ్లేషణలు నిర్వహించబడ్డాయి. నీటిలో పురుగుమందుల పరిమాణాత్మక నిర్ణయం అనుబంధ పదార్థంగా చూపబడింది (టేబుల్ SM1).
మైక్రోన్యూక్లియస్ టెస్ట్ (MNT) మరియు ఎర్ర కణ అణు అసాధారణ పరీక్ష (RNA) కోసం, ప్రతి చికిత్స సమూహం నుండి 15 టాడ్‌పోల్‌లను విశ్లేషించారు. టాడ్‌పోల్‌లను 5% లిడోకాయిన్ (50 mg g-170) తో మత్తుమందు చేశారు మరియు డిస్పోజబుల్ హెపారినైజ్డ్ సిరంజిలను ఉపయోగించి కార్డియాక్ పంక్చర్ ద్వారా రక్త నమూనాలను సేకరించారు. రక్త స్మెర్‌లను స్టెరైల్ మైక్రోస్కోప్ స్లైడ్‌లపై తయారు చేసి, గాలిలో ఎండబెట్టి, 100% మిథనాల్ (4 °C) తో 2 నిమిషాలు ఫిక్స్ చేసి, ఆపై చీకటిలో 15 నిమిషాలు 10% జీమ్సా ద్రావణంతో మరక చేశారు. ప్రక్రియ ముగింపులో, అదనపు మరకను తొలగించడానికి స్లైడ్‌లను స్వేదనజలంతో కడిగి గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద ఎండబెట్టారు.
ప్రతి టాడ్‌పోల్ నుండి కనీసం 1000 RBC లను 100× మైక్రోస్కోప్ ఉపయోగించి MN మరియు ENA ఉనికిని నిర్ణయించడానికి 71 లక్ష్యంతో విశ్లేషించారు. సైపర్‌మెత్రిన్ సాంద్రతలు మరియు నియంత్రణలను పరిగణనలోకి తీసుకుని టాడ్‌పోల్స్ నుండి మొత్తం 75,796 RBC లను మూల్యాంకనం చేశారు. కింది అణు గాయాల ఫ్రీక్వెన్సీని నిర్ణయించడం ద్వారా కారాస్కో మరియు ఇతరులు మరియు ఫెనెచ్ మరియు ఇతరులు 38,72 పద్ధతి ప్రకారం జెనోటాక్సిసిటీని విశ్లేషించారు: (1) అణు కణాలు: కేంద్రకాలు లేని కణాలు; (2) అపోప్టోటిక్ కణాలు: అణు ఫ్రాగ్మెంటేషన్, ప్రోగ్రామ్ చేయబడిన కణ మరణం; (3) బైన్యూక్లియేట్ కణాలు: రెండు కేంద్రకాలు కలిగిన కణాలు; (4) అణు మొగ్గలు లేదా బ్లేబ్ కణాలు: అణు పొర యొక్క చిన్న ప్రోట్రూషన్‌లతో న్యూక్లియైలు కలిగిన కణాలు, మైక్రోన్యూక్లియైలకు సమానమైన బ్లేబ్‌లు; (5) కార్యోలైజ్డ్ కణాలు: అంతర్గత పదార్థం లేకుండా కేంద్రకం యొక్క రూపురేఖలు మాత్రమే ఉన్న కణాలు; (6) నాచ్డ్ కణాలు: వాటి ఆకారంలో స్పష్టమైన పగుళ్లు లేదా నోచెస్ ఉన్న న్యూక్లియైలు కలిగిన కణాలు, వీటిని కిడ్నీ-ఆకారపు న్యూక్లియైలు అని కూడా పిలుస్తారు; (7) లోబ్యులేటెడ్ కణాలు: పైన పేర్కొన్న వెసికిల్స్ కంటే పెద్ద న్యూక్లియర్ ప్రోట్రూషన్స్ ఉన్న కణాలు; మరియు (8) మైక్రోసెల్స్: ఘనీభవించిన న్యూక్లియైలు మరియు తగ్గిన సైటోప్లాజం కలిగిన కణాలు. మార్పులను ప్రతికూల నియంత్రణ ఫలితాలతో పోల్చారు.
తీవ్రమైన విషప్రయోగ పరీక్ష ఫలితాలను (LC50) GBasic సాఫ్ట్‌వేర్ మరియు TSK-ట్రిమ్డ్ స్పియర్‌మ్యాన్-కార్బర్ పద్ధతిని ఉపయోగించి విశ్లేషించారు74. దీర్ఘకాలిక పరీక్ష డేటాను ఎర్రర్ నార్మాలిటీ (షాపిరో-విల్క్స్) మరియు సజాతీయత యొక్క వైవిధ్యం (బార్ట్‌లెట్) కోసం ముందే పరీక్షించారు. ఫలితాలను వన్-వే విశ్లేషణ ఆఫ్ వేరియెన్స్ (ANOVA) ఉపయోగించి విశ్లేషించారు. టుకే యొక్క పరీక్షను తమలో తాము డేటాను పోల్చడానికి ఉపయోగించారు మరియు చికిత్స సమూహం మరియు ప్రతికూల నియంత్రణ సమూహం మధ్య డేటాను పోల్చడానికి డన్నెట్ యొక్క పరీక్షను ఉపయోగించారు.
LOEC మరియు NOEC డేటాను డన్నెట్ పరీక్షను ఉపయోగించి విశ్లేషించారు. 95% (p < 0.05) ప్రాముఖ్యత స్థాయితో స్టాటిస్టికా 8.0 సాఫ్ట్‌వేర్ (స్టాట్‌సాఫ్ట్) ఉపయోగించి గణాంక పరీక్షలు నిర్వహించబడ్డాయి.