జొన్నలో టార్గెట్ లీఫ్ స్పాట్‌కు MAMP-ఎలిసిటెడ్ డిఫెన్స్ రెస్పాన్స్ మరియు రెసిస్టెన్స్ యొక్క బలం యొక్క జీనోమ్-వైడ్ అసోసియేషన్ విశ్లేషణ.

మొక్క మరియు వ్యాధికారక పదార్థాలు

జొన్న కన్వర్షన్ పాపులేషన్ (SCP) అని పిలువబడే జొన్న అసోసియేషన్ మ్యాపింగ్ జనాభాను ఇల్లినాయిస్ విశ్వవిద్యాలయంలో (ఇప్పుడు UC డేవిస్‌లో) డాక్టర్ పాట్ బ్రౌన్ అందించారు. దీనిని గతంలో వివరించబడింది మరియు US పరిసరాలలో మొక్కల పెరుగుదల మరియు అభివృద్ధిని సులభతరం చేయడానికి ఫోటోపీరియడ్-ఇన్‌సెన్సిటివిటీ మరియు చిన్న ఎత్తుగా మార్చబడిన విభిన్న రేఖల సమాహారం. ఈ అధ్యయనంలో ఈ జనాభా నుండి 510 పంక్తులు ఉపయోగించబడ్డాయి, అయితే చెడు అంకురోత్పత్తి మరియు ఇతర నాణ్యత నియంత్రణ సమస్యల కారణంగా, మూడు లక్షణాల విశ్లేషణలో అన్ని పంక్తులు ఉపయోగించబడలేదు. చివరికి చిటిన్ ప్రతిస్పందన విశ్లేషణ కోసం 345 పంక్తుల నుండి డేటాను, flg22 ప్రతిస్పందన కోసం 472 పంక్తులు మరియు TLS నిరోధకత కోసం 456 పంక్తుల నుండి డేటాను ఉపయోగించారు.బి. కుకీఆర్కాన్సాస్ విశ్వవిద్యాలయంలో డాక్టర్ బర్ట్ బ్లూమ్ నుండి స్ట్రెయిన్ LSLP18 పొందబడింది.

MAMP ప్రతిస్పందన కొలత

ఈ అధ్యయనంలో రెండు వేర్వేరు MAMPలు ఉపయోగించబడ్డాయి flg22, (జెన్‌స్క్రిప్ట్ కేటలాగ్ # RP19986), మరియు చిటిన్. గ్రీన్‌హౌస్‌లో మట్టితో నిండిన ఫ్లాట్‌లపై వేసిన ఇన్సర్ట్‌లలో జొన్న మొక్కలను పెంచారు (33% సన్‌షైన్ రెడీ-ఎర్త్ ప్రో గ్రోయింగ్ మిక్స్). సేకరణ రోజున అదనపు ఆకు తేమను నివారించడానికి నమూనా సేకరణకు ముందు రోజు మొక్కలకు నీరు పెట్టారు.

ఈ లైన్లను యాదృచ్ఛికంగా మార్చారు మరియు లాజిస్టికల్ కారణాల వల్ల, 60 లైన్ల బ్యాచ్‌లలో నాటారు. ప్రతి లైన్‌కు, మూడు 'కుండలు' ఒక లైన్‌కు రెండు విత్తనాలతో నాటారు. మొత్తం జనాభాను అంచనా వేసే వరకు మునుపటి బ్యాచ్ ప్రాసెస్ చేయబడిన వెంటనే తదుపరి బ్యాచ్‌లు నాటబడ్డాయి. రెండు పరుగులలో ప్రతిదానిలో జన్యురూపాలను తిరిగి యాదృచ్ఛికంగా మార్చిన రెండు MAMPల కోసం రెండు ప్రయోగాత్మక పరుగులు నిర్వహించబడ్డాయి.

గతంలో వివరించిన విధంగా ROS పరీక్షలు జరిగాయి. క్లుప్తంగా, ప్రతి పంక్తికి, ఆరు విత్తనాలను 3 వేర్వేరు కుండలలో నాటారు. ఫలితంగా వచ్చిన మొలకల నుండి, ఏకరూపత ఆధారంగా మూడు ఎంపిక చేయబడ్డాయి. అసాధారణంగా కనిపించే లేదా చాలా ఎక్కువ లేదా తక్కువ ఉన్న మొలకలని ఉపయోగించలేదు. 15 రోజుల వయస్సు గల మూడు వేర్వేరు జొన్న మొక్కల 4వ ఆకు యొక్క విశాలమైన భాగం నుండి 3 మిమీ వ్యాసం కలిగిన నాలుగు ఆకు డిస్క్‌లను తొలగించారు. రెండు మొక్కల నుండి ఒక ఆకుకు ఒక డిస్క్ మరియు ఒక మొక్క నుండి రెండు డిస్క్‌లు, రెండవ డిస్క్ నీటి నియంత్రణగా మారింది (క్రింద చూడండి). డిస్కులను ఒక్కొక్కటిగా 50 µl H20 పై నల్లటి 96-బావి ప్లేట్‌లో తేలుతూ, కాంతికి గురికాకుండా ఉండటానికి అల్యూమినియం సీల్‌తో సీలు చేసి, రాత్రిపూట గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద ఉంచారు. మరుసటి రోజు ఉదయం 2 mg/ml కెమిలుమినిసెంట్ ప్రోబ్ L-012 (వాకో, కేటలాగ్ # 120-04891), 2 mg/ml హార్స్‌రాడిష్ పెరాక్సిడేస్ (టైప్ VI-A, సిగ్మా-ఆల్డ్రిచ్, కేటలాగ్ # P6782), మరియు 100 mg/ml చిటిన్ లేదా 2 μM Flg22 ఉపయోగించి ప్రతిచర్య ద్రావణం తయారు చేయబడింది. ఈ ప్రతిచర్య ద్రావణంలో 50 µl నాలుగు బావులలో మూడింటికి జోడించబడింది. నాల్గవ బావి ఒక మాక్ కంట్రోల్, దీనికి MAMP మినహా ప్రతిచర్య ద్రావణం జోడించబడింది. ప్రతి ప్లేట్‌లో నీరు మాత్రమే ఉన్న నాలుగు ఖాళీ బావులు కూడా చేర్చబడ్డాయి.

ప్రతిచర్య ద్రావణాన్ని జోడించిన తర్వాత, ప్రతి 2 నిమిషాలకు 1 గంటకు సినర్జీ™ 2 మల్టీ-డిటెక్షన్ మైక్రోప్లేట్ రీడర్ (బయోటెక్) ఉపయోగించి కాంతి ప్రకాశాన్ని కొలుస్తారు. ఈ 1 గంటలో ప్లేట్ రీడర్ ప్రతి 2 నిమిషాలకు కాంతి ప్రకాశ కొలతలను తీసుకుంటుంది. ప్రతి బావికి విలువను ఇవ్వడానికి అన్ని 31 రీడింగుల మొత్తాన్ని లెక్కించారు. ప్రతి జన్యురూపానికి MAMP ప్రతిస్పందన కోసం అంచనా వేసిన విలువను (మూడు ప్రయోగాత్మక బావుల సగటు కాంతి ప్రకాశ విలువ - మాక్ బావి విలువ) - సగటు ఖాళీ బావి విలువను తీసివేసి లెక్కించారు. ఖాళీ బావి విలువలు స్థిరంగా సున్నాకి దగ్గరగా ఉన్నాయి.

యొక్క లీఫ్ డిస్క్‌లునికోటియానా బెంథామియానా, నాణ్యత నియంత్రణ ప్రయోజనాల కోసం ప్రతి 96-బావి ప్లేట్‌లో ఒక అధిక ప్రతిస్పందనాత్మక జొన్న లైన్ (SC0003), మరియు ఒక తక్కువ ప్రతిస్పందనాత్మక జొన్న లైన్ (PI 6069) కూడా నియంత్రణలుగా చేర్చబడ్డాయి.

బి. కుకీఐనోక్యులమ్ తయారీ మరియు టీకాలు వేయడం

బి. కుకీగతంలో వివరించిన విధంగా ఇనోక్యులమ్ తయారు చేయబడింది. క్లుప్తంగా, జొన్న గింజలను మూడు రోజులు నీటిలో నానబెట్టి, శుభ్రం చేసి, 1 లీటర్ కోనికల్ ఫ్లాస్క్‌లలో తీసివేసి, 15psi మరియు 121 °C వద్ద ఒక గంట పాటు ఆటోక్లేవ్ చేశారు. తరువాత ధాన్యాలకు తాజా కల్చర్ నుండి 5 ml మెసెరేటెడ్ మైసిలియాను టీకాలు వేశారు.బి. కుకీLSLP18 ను వేరుచేసి గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 2 వారాల పాటు ఉంచి, ప్రతి 3 రోజులకు ఒకసారి ఫ్లాస్క్‌లను కదిలించారు. 2 వారాల తర్వాత, ఫంగస్ సోకిన జొన్న గింజలను గాలిలో ఎండబెట్టి, పొలంలో టీకాలు వేసే వరకు 4 °C వద్ద నిల్వ చేస్తారు. అదే ఐనోక్యులమ్‌ను మొత్తం ట్రయల్ కోసం ఉపయోగించారు మరియు ప్రతి సంవత్సరం తాజాగా తయారు చేస్తారు. టీకాలు వేయడానికి, 6–10 సోకిన గింజలను 4–5 వారాల వయస్సు గల జొన్న మొక్కల గుండ్రంలో ఉంచారు. ఈ శిలీంధ్రాల నుండి ఉత్పత్తి అయ్యే బీజాంశాలు ఒక వారంలోనే యువ జొన్న మొక్కలలో సంక్రమణను ప్రారంభించాయి.

విత్తనాల తయారీ

పొలంలో నాటడానికి ముందు జొన్న విత్తనాన్ని ~ 1% స్పిరాటో 480 FS శిలీంద్ర సంహారిణి, 4% సెబ్రింగ్ 480 FS శిలీంద్ర సంహారిణి, 3% సోర్ప్రో 940 ES సీడ్ సేఫ్నర్ కలిగిన శిలీంద్ర సంహారిణి, పురుగుమందు మరియు సేఫ్నర్ మిశ్రమంతో చికిత్స చేశారు. తరువాత విత్తనాలను 3 రోజులు గాలిలో ఎండబెట్టారు, ఇది విత్తనాల చుట్టూ ఈ మిశ్రమం యొక్క పలుచని పూతను అందించింది. సేఫ్నర్ హెర్బిసైడ్ డ్యూయల్ మాగ్నమ్‌ను ముందస్తు చికిత్సగా ఉపయోగించడానికి అనుమతించింది.

టార్గెట్ లీఫ్ స్పాట్ నిరోధకత యొక్క మూల్యాంకనం

SCP ని జూన్ 14–15 2017 మరియు జూన్ 20, 2018 తేదీలలో NCలోని క్లేటన్‌లోని సెంట్రల్ క్రాప్స్ రీసెర్చ్ స్టేషన్‌లో యాదృచ్ఛిక పూర్తి బ్లాక్ డిజైన్‌లో నాటారు, ప్రతి సందర్భంలో రెండు ప్రయోగాత్మక ప్రతిరూపాలు ఉన్నాయి. ప్రయోగాలు 1.8 మీటర్ల సింగిల్ వరుసలలో 0.9 మీటర్ల వరుస వెడల్పుతో ప్లాట్‌కు 10 విత్తనాలను ఉపయోగించి నాటబడ్డాయి. అంచు ప్రభావాలను నివారించడానికి ప్రతి ప్రయోగం యొక్క అంచున రెండు సరిహద్దు వరుసలను నాటారు. ప్రయోగాలు జూలై 20, 2017 మరియు జూలై 20, 2018 తేదీలలో టీకాలు వేయబడ్డాయి, ఆ సమయంలో జొన్న మొక్కలు పెరుగుదల దశ 3లో ఉన్నాయి. ఒకటి నుండి తొమ్మిది ప్రమాణాలపై రేటింగ్‌లు తీసుకోబడ్డాయి, ఇక్కడ వ్యాధి సంకేతాలు లేని మొక్కలను తొమ్మిదిగా మరియు పూర్తిగా చనిపోయిన మొక్కలను ఒకటిగా స్కోర్ చేశారు. ప్రతి సంవత్సరం టీకాలు వేసిన రెండు వారాల తర్వాత 2017లో రెండు రేటింగ్‌లు మరియు 2018లో నాలుగు రీడింగ్‌లు తీసుకోబడ్డాయి. గతంలో వివరించిన విధంగా sAUDPC (వ్యాధి పురోగతి వక్రరేఖ కింద ప్రామాణిక ప్రాంతం) లెక్కించబడింది.