MAMP-ఎలిసిటెడ్ డిఫెన్స్ రెస్పాన్స్ యొక్క బలం మరియు జొన్నలో ఆకు మచ్చకు ప్రతిఘటన యొక్క జీనోమ్-వైడ్ అసోసియేషన్ విశ్లేషణ

మొక్క మరియు వ్యాధికారక పదార్థాలు

జొన్న కన్వర్షన్ పాపులేషన్ (SCP) అని పిలువబడే జొన్న అసోసియేషన్ మ్యాపింగ్ పాపులేషన్‌ను ఇల్లినాయిస్ విశ్వవిద్యాలయంలో (ప్రస్తుతం UC డేవిస్‌లో ఉంది) డాక్టర్ పాట్ బ్రౌన్ అందించారు.ఇది గతంలో వివరించబడింది మరియు US పరిసరాలలో మొక్కల పెరుగుదల మరియు అభివృద్ధిని సులభతరం చేయడానికి ఫోటోపెరియోడ్-ఇన్సెన్సిటివిటీ మరియు చిన్న పొట్టిగా మార్చబడిన విభిన్న రేఖల సమాహారం.ఈ జనాభా నుండి 510 లైన్లు ఈ అధ్యయనంలో ఉపయోగించబడ్డాయి, అయితే చెడు అంకురోత్పత్తి మరియు ఇతర నాణ్యత నియంత్రణ సమస్యల కారణంగా, మూడు లక్షణాల విశ్లేషణలో అన్ని పంక్తులు ఉపయోగించబడలేదు.చిటిన్ ప్రతిస్పందన యొక్క విశ్లేషణ కోసం 345 లైన్ల నుండి డేటా ఉపయోగించబడింది, flg22 ప్రతిస్పందన కోసం 472 లైన్లు మరియు TLS రెసిస్టెన్స్ కోసం 456.బి. కుకీస్ట్రెయిన్ LSLP18 అర్కాన్సాస్ విశ్వవిద్యాలయంలో డాక్టర్ బర్ట్ బ్లూమ్ నుండి పొందబడింది.

MAMP ప్రతిస్పందన కొలత

ఈ అధ్యయనంలో రెండు వేర్వేరు MAMPలు ఉపయోగించబడ్డాయి flg22, (జెన్‌స్క్రిప్ట్ కేటలాగ్# RP19986), మరియు చిటిన్ .గ్రీన్‌హౌస్‌లో మట్టి (33% సన్‌షైన్ రెడి-ఎర్త్ ప్రో గ్రోయింగ్ మిక్స్)తో నిండిన ఫ్లాట్‌లపై వేసిన ఇన్సర్ట్‌లలో జొన్న మొక్కలు పెంచబడ్డాయి.సేకరణ రోజున అదనపు ఆకు తేమను నివారించడానికి నమూనా సేకరణకు ముందు రోజు మొక్కలకు నీరు పోస్తారు.

పంక్తులు యాదృచ్ఛికంగా మార్చబడ్డాయి మరియు లాజిస్టికల్ కారణాల వల్ల 60 లైన్ల బ్యాచ్‌లలో నాటబడ్డాయి.ఒక్కో లైనుకు మూడు 'కుండీలు' చొప్పున రెండు విత్తనాలు నాటారు.మొత్తం జనాభాను అంచనా వేసే వరకు మునుపటి బ్యాచ్ ప్రాసెస్ చేయబడిన వెంటనే తదుపరి బ్యాచ్‌లు నాటబడ్డాయి.రెండు MAMPల కోసం రెండు ప్రయోగాత్మక పరుగులు నిర్వహించబడ్డాయి, ప్రతి రెండు పరుగులలో జన్యురూపాలు తిరిగి యాదృచ్ఛికంగా మార్చబడ్డాయి.

గతంలో వివరించిన విధంగా ROS పరీక్షలు జరిగాయి.క్లుప్తంగా, ప్రతి పంక్తి కోసం, ఆరు విత్తనాలను 3 వేర్వేరు కుండలలో నాటారు.ఫలితంగా వచ్చే మొలకల నుండి, ఏకరూపత ఆధారంగా మూడు ఎంపిక చేయబడ్డాయి.అసాధారణంగా కనిపించే లేదా మెజారిటీ కంటే చాలా పొడవుగా లేదా తక్కువగా ఉండే మొలకలు ఉపయోగించబడలేదు.మూడు వేర్వేరు 15 రోజుల జొన్న మొక్కల 4వ ఆకు యొక్క విశాలమైన భాగం నుండి 3 మిమీ వ్యాసం కలిగిన నాలుగు లీఫ్ డిస్క్‌లు తొలగించబడ్డాయి.రెండు మొక్కల నుండి ఆకుకు ఒక డిస్క్ మరియు ఒక మొక్క నుండి రెండు డిస్క్‌లు, రెండవ డిస్క్ నీటి నియంత్రణగా మారుతుంది (క్రింద చూడండి).డిస్క్‌లు ఒక్కొక్కటిగా 50 µl H20పై నల్లటి 96-బావి ప్లేట్‌లో తేలాయి, కాంతికి గురికాకుండా ఉండటానికి అల్యూమినియం సీల్‌తో మూసివేయబడతాయి మరియు రాత్రిపూట గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద ఉంచబడతాయి.మరుసటి రోజు ఉదయం 2 mg/ml కెమిలుమినిసెంట్ ప్రోబ్ L-012 (వాకో, కేటలాగ్ # 120-04891), 2 mg/ml గుర్రపుముల్లంగి పెరాక్సిడేస్ (టైప్ VI-A, సిగ్మా-ఆల్డ్రిచ్, కేటలాగ్ # P6782) మరియు 100 mg/ml చిటిన్ లేదా 2 μM Flg22.ఈ ప్రతిచర్య ద్రావణం యొక్క 50 µl నాలుగు బావులలో మూడింటికి జోడించబడింది.నాల్గవ బావి మాక్ కంట్రోల్, దీనికి MAMP మినహా ప్రతిచర్య పరిష్కారం జోడించబడింది.ప్రతి ప్లేట్‌లో నీరు మాత్రమే ఉన్న నాలుగు ఖాళీ బావులు కూడా చేర్చబడ్డాయి.

ప్రతిచర్య పరిష్కారాన్ని జోడించిన తర్వాత, 1 గంటకు ప్రతి 2 నిమిషాలకు సినర్జీ TM 2 మల్టీ-డిటెక్షన్ మైక్రోప్లేట్ రీడర్ (బయోటెక్) ఉపయోగించి కాంతిని కొలుస్తారు.ప్లేట్ రీడర్ ఈ 1 గంటలో ప్రతి 2 నిమిషాలకు కాంతి కొలతలను తీసుకుంటుంది.ప్రతి బావికి విలువ ఇవ్వడానికి మొత్తం 31 రీడింగ్‌ల మొత్తం లెక్కించబడుతుంది.ప్రతి జన్యురూపం కోసం MAMP ప్రతిస్పందన కోసం అంచనా వేయబడిన విలువ (మూడు ప్రయోగాత్మక బావుల యొక్క సగటు ప్రకాశం విలువ-మాక్ వెల్ విలువ)గా లెక్కించబడుతుంది - సగటు ఖాళీ బావి విలువ మైనస్.ఖాళీ బావి విలువలు స్థిరంగా సున్నాకి దగ్గరగా ఉన్నాయి.

యొక్క లీఫ్ డిస్క్‌లునికోటియానా బెంథామియానా, ఒక అధిక ప్రతిస్పందించే జొన్న లైన్ (SC0003), మరియు ఒక తక్కువ ప్రతిస్పందించే జొన్న లైన్ (PI 6069) కూడా నాణ్యత నియంత్రణ ప్రయోజనాల కోసం ప్రతి 96-బావి ప్లేట్‌లో నియంత్రణలుగా చేర్చబడ్డాయి.

బి. కుకీinoculum తయారీ మరియు టీకాలు వేయడం

బి. కుకీగతంలో వివరించిన విధంగా inoculum తయారు చేయబడింది.క్లుప్తంగా, జొన్న గింజలను మూడు రోజులు నీటిలో నానబెట్టి, కడిగి, 1L శంఖాకార ఫ్లాస్క్‌లలోకి తీసుకుని, 15psi మరియు 121 °C వద్ద ఒక గంట పాటు ఆటోక్లేవ్ చేయబడింది.ధాన్యాలు తాజా సంస్కృతి నుండి సుమారు 5 మి.లీబి. కుకీLSLP18 వేరుచేయబడి, గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 2 వారాల పాటు వదిలివేయబడుతుంది, ప్రతి 3 రోజులకు ఫ్లాస్క్‌లను కదిలిస్తుంది.2 వారాల తర్వాత, ఫంగస్ సోకిన జొన్న గింజలను గాలిలో ఎండబెట్టి, ఆపై పొలంలో టీకాలు వేసే వరకు 4 °C వద్ద నిల్వ చేస్తారు.మొత్తం ట్రయల్ కోసం అదే ఐనోక్యులమ్‌ను ఉపయోగించారు మరియు ప్రతి సంవత్సరం తాజాగా తయారు చేయబడింది.టీకాలు వేయడానికి, 6-10 సోకిన గింజలను 4-5 వారాల వయస్సు గల జొన్న మొక్కలలో ఉంచారు.ఈ శిలీంధ్రాల నుండి ఉత్పత్తి చేయబడిన బీజాంశం ఒక వారంలో యువ జొన్న మొక్కలలో సంక్రమణను ప్రారంభించింది.

విత్తన తయారీ

పొలంలో జొన్న విత్తనాన్ని నాటడానికి ముందు శిలీంద్ర సంహారిణి, పురుగుల మందు మరియు సురక్షిత మిశ్రమంతో ~ 1% స్పిరాటో 480 ఎఫ్‌ఎస్ శిలీంద్ర సంహారిణి, 4% సెబ్రింగ్ 480 ఎఫ్‌ఎస్ శిలీంద్ర సంహారిణి, 3% సోర్ప్రో 940 ఇఎస్ సీడ్ సేఫ్‌నర్‌ను కలిగి ఉంటుంది.అప్పుడు విత్తనాలను 3 రోజులు గాలిలో ఎండబెట్టి, విత్తనాల చుట్టూ ఈ మిశ్రమం యొక్క పలుచని పూతను అందించింది.సేఫ్నర్ హెర్బిసైడ్ డ్యూయల్ మాగ్నమ్‌ను ప్రీ-ఎమర్జెన్స్ ట్రీట్‌మెంట్‌గా ఉపయోగించడానికి అనుమతించింది.

టార్గెట్ లీఫ్ స్పాట్ రెసిస్టెన్స్ యొక్క మూల్యాంకనం

జూన్ 14–15 2017 మరియు జూన్ 20, 2018లో క్లేటన్, NCలోని సెంట్రల్ క్రాప్స్ రీసెర్చ్ స్టేషన్‌లో SCP ప్రతి సందర్భంలో రెండు ప్రయోగాత్మక ప్రతిరూపాలతో యాదృచ్ఛిక పూర్తి బ్లాక్ డిజైన్‌లో నాటబడింది.ఒక్కో ప్లాట్‌కు 10 విత్తనాలను ఉపయోగించి 0.9 మీటర్ల వరుస వెడల్పుతో 1.8 మీటర్ల సింగిల్ వరుసలలో ప్రయోగాలు చేశారు.అంచు ప్రభావాలను నివారించడానికి ప్రతి ప్రయోగం యొక్క అంచు చుట్టూ రెండు అంచు వరుసలు నాటబడ్డాయి.ప్రయోగాలు జూలై 20, 2017 మరియు జూలై 20, 2018న టీకాలు వేయబడ్డాయి, ఆ సమయంలో జొన్న మొక్కలు వృద్ధి దశలో 3 ఉన్నాయి. రేటింగ్‌లు ఒకటి నుండి తొమ్మిది స్కేల్స్‌లో తీసుకోబడ్డాయి, ఇక్కడ వ్యాధి సంకేతాలు లేని మొక్కలు తొమ్మిది మరియు పూర్తిగా స్కోర్ చేయబడ్డాయి. చనిపోయిన మొక్కలు ఒకటిగా స్కోర్ చేయబడ్డాయి.ప్రతి సంవత్సరం టీకాలు వేసిన రెండు వారాల తర్వాత 2017లో రెండు రేటింగ్‌లు తీసుకోబడ్డాయి మరియు 2018లో నాలుగు రీడింగ్‌లు తీసుకోబడ్డాయి.sAUDPC (వ్యాధి పురోగతి వక్రరేఖ క్రింద ప్రామాణిక ప్రాంతం) గతంలో వివరించిన విధంగా లెక్కించబడుతుంది.